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油红O染色

一、实验原理

简介：

1、油红O为脂溶性染料，在脂肪内能高度溶解，可特异性的使组织内甘油三脂等中性脂肪着色，常用于检测细胞或组织脂质累积。脂滴呈红色，细胞核为蓝紫色。

2、脂滴，储存中性脂肪，主要为甘油三酯和胆固醇酯，是脂肪细胞的主要成分。病理情况下，某些组织器官的脂肪变性、脂类物质异常沉积会导致细胞中脂滴明显变大或增多。

3、研究领域，脂滴数量分布、形态变化，与许多疾病息息相关，比如心血管疾病中的动脉粥样硬化，酒精性或非酒精性脂肪肝，炎症，癌症，病毒感染等等，通过观测油红O染色脂滴的变化探索其代谢关联。

 

二、染色步骤

1、冰冻切片染色步骤：

（备注：脂类物质经过酒精、二甲苯等有机溶剂会被溶解，故不能用石蜡切片做油红O染色）

（1）将冰冻切片从-20℃取出，4%多聚甲醛固定2min，纯水洗，复温。

（2）按比例配制油红O工作液，混合后静置10min，过滤。

（3）用组化笔在组织周围画圈，防止后面过程孵育液流走，纯水洗。

（4）将切片用60%异丙醇浸洗1~2min。

（5）滴加适量工作液，室温染15min。

（6）60%异丙醇分化2~3min，镜下控制时间，纯水洗。

（7）苏木素染核1~5min，自来水洗，1%盐酸分化，自来水洗，1%氨水返蓝,，自来水洗。

（8）甘油明胶封片。

2、细胞染色步骤：

（1）倒去培养基，用PBS洗3次，每次5min。

（2）用4%多聚甲醛固定10~20min, 纯水洗3次，每次5min。

（3）按比例配制油红O工作液，混合后静置10min，过滤。

（4）将细胞用60%异丙醇浸洗1~2min。

（5）滴加适量工作液，染10min。

（6）60%异丙醇分化2~3min，镜下控制时间，纯水洗。

（7）天青石蓝染液处理3min，纯水洗。

（8）苏木素染核1~5min，纯水洗，1%盐酸分化，纯水洗，1%氨水返蓝，纯水洗。

（9）将玻片取出，用甘油明胶封片。

 

三、结果分析与评价

1、大鼠肝冰冻切片：如果肝脏长期脂质代谢失衡，会使脂肪在肝细胞内大量堆积，导致肝脏脂肪变性、结构紊乱。肝细胞变性时，细胞质内可能会出现大小不一的空泡，为鉴别其空泡是脂质、糖原、水样变性，可以用冰冻切片做油红O染色，通过脂质沉积处呈红色来判断。

大鼠肝冰冻切片 100-1	大鼠肝冰冻切片 100-2
大鼠肝冰冻切片 100-3	大鼠肝冰冻切片 100-4

 

2、3T3-L1细胞：小鼠胚胎成纤维细胞，具有多向分化潜能，可诱导分化为脂肪细胞，通过油红O染色检测细胞内脂滴形成情况，比如观察脂滴数量、大小，可用于糖尿病、肥胖等疾病研究。

3T3-L1 200-1	3T3-L1 200-2

A549 200-1	A549 200-2

4、HK2细胞：人肾皮质近曲小管上皮细胞，设置干预条件后，通过油红O染色观察细胞内的脂滴聚集，脂质沉积情况，可研究肾脏脂质沉积对肾小管葡萄糖重吸收的影响、脂质代谢紊乱与糖尿病肾病等方面。

HK2 200-1	HK2 200-2

 

5、原代大鼠脂肪间充质干细胞：参与脂肪细胞的增殖、修复，在脂质代谢、肥胖等方面有重要作用，有分化潜能，比如可用于成脂、成骨诱导分化实验，通过油红O染色，观察细胞脂滴形成情况、形态结构变化，探索研究其特性、以及干预肥胖症的条件。

原代大鼠脂肪间充质干细胞 200-1	原代大鼠脂肪间充质干细胞 200-2